Ibajẹ ti awọn aṣa sẹẹli le di iṣoro ti o wọpọ julọ ni awọn ile-iṣere aṣa sẹẹli, nigbakan nfa awọn abajade to lewu pupọ.Awọn contaminants aṣa sẹẹli le pin si awọn ẹka meji, awọn idoti kemikali gẹgẹbi alabọde, omi ara ati awọn idoti omi, awọn endotoxins, awọn ṣiṣu ṣiṣu ati awọn ohun mimu, ati awọn contaminants ti ibi bi kokoro arun, molds, yeasts, virus, mycoplasmas cross infection.Ti doti nipasẹ awọn laini sẹẹli miiran.Botilẹjẹpe ko ṣee ṣe lati yọkuro idoti patapata, igbohunsafẹfẹ rẹ ati iwuwo le dinku nipasẹ agbọye orisun rẹ daradara ati tẹle awọn ilana aseptic to dara.
1.This apakan atoka akọkọ orisi ti ibi kontaminesonu:
Kokoro arun
Mold ati kokoro koti
Ibajẹ Mycoplasma
Iwukara idoti
1.1 Kokoro arun
Awọn kokoro arun jẹ ẹgbẹ nla ti awọn microorganisms kanṣoṣo ti o wa ni ibi gbogbo.Wọn maa n jẹ awọn microns diẹ ni iwọn ila opin ati pe o le wa ni ọpọlọpọ awọn apẹrẹ, lati awọn aaye si awọn ọpa ati awọn spirals.Nitori ibigbogbo wọn, iwọn, ati oṣuwọn idagbasoke ni kiakia, awọn kokoro arun, pẹlu awọn iwukara ati awọn mimu, jẹ awọn contaminants ti ibi ti o wọpọ julọ ni aṣa sẹẹli.
1.1.1 Iwari ti Kokoro Kokoro
Kokoro kokoro jẹ irọrun rii ni irọrun nipasẹ ayewo wiwo ti aṣa laarin awọn ọjọ diẹ ti o di akoran;
Awọn aṣa ti o ni akoran nigbagbogbo han kurukuru (ie, turbid), nigbakan pẹlu fiimu tinrin lori dada.
Awọn silė lojiji ni pH ti alabọde aṣa tun jẹ alabapade nigbagbogbo.
Labẹ maikirosikopu agbara kekere, awọn kokoro arun han bi kekere, awọn granules gbigbe laarin awọn sẹẹli, ati akiyesi labẹ microscope agbara giga le yanju awọn apẹrẹ ti awọn kokoro arun kọọkan.
1.2Mold & Kokoro Kokoro
1.2.1 m kontaminesonu
Molds jẹ awọn microorganisms eukaryotic ti ijọba olu ti o dagba ni irisi filaments multicellular ti a pe ni hyphae.Awọn nẹtiwọọki asopọ ti awọn filaments multicellular wọnyi ni awọn ekuro ti o jọra ti jiini ninu ti a pe ni awọn ileto tabi mycelium.
Iru si idoti iwukara, pH ti aṣa naa duro ni iduroṣinṣin lakoko ipele ibẹrẹ ti ibajẹ ati lẹhinna pọ si ni iyara bi aṣa naa ṣe ni akoran pupọ pupọ ti o si di kurukuru.Labẹ maikirosikopu, mycelium nigbagbogbo jẹ filamentous, nigbamiran bi awọn iṣupọ ipon ti awọn spores.Awọn spores ti ọpọlọpọ awọn molds le ye ninu awọn agbegbe ti o lera pupọ ati aibikita lakoko akoko isinmi wọn ati pe wọn mu ṣiṣẹ nikan nigbati awọn ipo idagbasoke to tọ ba pade.
1.2.2 Kokoro Kokoro
Awọn ọlọjẹ jẹ awọn aṣoju àkóràn airi ti o gba awọn ẹrọ sẹẹli ti o gbalejo fun ẹda.Iwọn kekere wọn jẹ ki wọn nira lati rii ni aṣa ati lati yọkuro kuro ninu awọn reagents ti a lo ninu awọn ile-iṣẹ aṣa sẹẹli.Niwọn igba ti ọpọlọpọ awọn ọlọjẹ ni awọn ibeere ti o muna pupọ fun awọn agbalejo wọn, wọn nigbagbogbo ko ni ipa lori awọn aṣa sẹẹli ti awọn eya miiran ju agbalejo naa.
Bibẹẹkọ, lilo awọn aṣa sẹẹli ti o ni kokoro-arun le fa eewu nla si ilera ti oṣiṣẹ ile-iyẹwu, paapaa ti eniyan tabi awọn sẹẹli alakọbẹrẹ ti dagba ninu yàrá.
Kokoro gbogun ti ni awọn aṣa sẹẹli ni a le rii nipasẹ microscopy elekitironi, ajẹsara ajẹsara pẹlu akojọpọ awọn aporo-ara, ELISA, tabi PCR pẹlu awọn alakoko gbogun ti o yẹ.
1.3 Mycoplasma idoti
Mycoplasmas jẹ kokoro arun ti o rọrun laisi awọn odi sẹẹli, ati pe wọn ro pe o jẹ awọn ohun alumọni ti o kere ju ti ara ẹni.Nitori iwọn kekere wọn pupọ (nigbagbogbo kere ju 1 micron), mycoplasma nira lati rii titi wọn o fi de awọn iwuwo giga ti o ga pupọ ati fa ki awọn aṣa sẹẹli bajẹ;Titi di igba naa, nigbagbogbo ko si ami ti o han gbangba ti akoran.
1.3.1 Iwari ti mycoplasma kontaminesonu
Diẹ ninu awọn mycoplasmas ti o lọra le tẹsiwaju ninu awọn aṣa laisi fa iku sẹẹli, ṣugbọn wọn paarọ ihuwasi ati iṣelọpọ ti awọn sẹẹli agbalejo ni awọn aṣa.
Àkóràn mycoplasma oníbalẹ̀ lè jẹ́ àfihàn ìwọ̀n ìdàgbàsókè sẹ́ẹ̀lì tí ó dín kù, dídín iwuwo ẹkúnrẹ́rẹ́ àti agglutination nínú àṣà ìdádúró.
Sibẹsibẹ, ọna ti o gbẹkẹle nikan lati ṣe awari ibajẹ mycoplasma ni lati ṣe idanwo aṣa nigbagbogbo nipa lilo abawọn fluorescent (fun apẹẹrẹ, Hoechst 33258), ELISA, PCR, immunostaining, autoradiography, tabi idanwo microbial.
1.4 iwukara idoti
Awọn iwukara jẹ awọn eukaryotes oni-ẹyọkan ti ijọba olu, ti o wa ni iwọn lati awọn microns diẹ (nigbagbogbo) si 40 microns (ṣọwọn).
1.4.1Iwari ti iwukara idoti
Gẹgẹbi pẹlu ibajẹ kokoro-arun, awọn aṣa ti a doti pẹlu iwukara le di kurukuru, paapaa ti ibajẹ ba wa ni ipele ilọsiwaju.Awọn pH ti awọn aṣa ti a ti doti pẹlu iwukara yipada diẹ diẹ titi ti ibajẹ yoo di diẹ sii, ni ipele wo ni pH maa n pọ si.Labẹ maikirosikopu, iwukara yoo han bi ovoid kọọkan tabi awọn patikulu iyipo ati pe o le gbe awọn patikulu kekere jade.
2.Cross ikolu
Botilẹjẹpe ko wọpọ bi ibajẹ makirobia, ilolupo agbelebu lọpọlọpọ ti ọpọlọpọ awọn laini sẹẹli pẹlu HeLa ati awọn laini sẹẹli ti o dagba ni iyara jẹ iṣoro asọye kedere pẹlu awọn abajade to ṣe pataki.Gba awọn laini sẹẹli lati awọn banki sẹẹli olokiki, ṣayẹwo nigbagbogbo awọn abuda ti awọn laini sẹẹli, ati lo awọn ilana aseptic to dara.Awọn iṣe wọnyi yoo ṣe iranlọwọ fun ọ lati yago fun ibajẹ agbelebu.Itẹka DNA, karyotyping ati isotyping le jẹrisi boya ibajẹ-agbelebu wa ninu aṣa sẹẹli rẹ.
Botilẹjẹpe ko wọpọ bi ibajẹ makirobia, ilolupo agbelebu lọpọlọpọ ti ọpọlọpọ awọn laini sẹẹli pẹlu HeLa ati awọn laini sẹẹli ti o dagba ni iyara jẹ iṣoro asọye kedere pẹlu awọn abajade to ṣe pataki.Gba awọn laini sẹẹli lati awọn banki sẹẹli olokiki, ṣayẹwo nigbagbogbo awọn abuda ti awọn laini sẹẹli, ati lo awọn ilana aseptic to dara.Awọn iṣe wọnyi yoo ṣe iranlọwọ fun ọ lati yago fun ibajẹ agbelebu.Itẹka DNA, karyotyping ati isotyping le jẹrisi boya ibajẹ-agbelebu wa ninu aṣa sẹẹli rẹ.
Akoko ifiweranṣẹ: Kínní-01-2023