Ọkan ninu awọn anfani akọkọ ti aṣa sẹẹli ni agbara lati ṣe afọwọyi kemistri ti ara ti ẹda sẹẹli (ie iwọn otutu, pH, titẹ osmotic, O2 ati CO2 ẹdọfu) ati agbegbe ti ẹkọ iṣe-ara (ie homonu ati ifọkansi ounjẹ).Ni afikun si iwọn otutu, agbegbe aṣa jẹ iṣakoso nipasẹ alabọde idagbasoke.
Botilẹjẹpe agbegbe ti ẹkọ iṣe-ara ti aṣa ko ṣe kedere bi agbegbe ti ara ati ti kemikali, oye ti o dara julọ ti awọn paati omi ara, idanimọ ti awọn ifosiwewe idagbasoke ti o nilo fun afikun, ati oye ti o dara julọ ti microenvironment ti awọn sẹẹli ni aṣa.(Ibaraẹnisọrọ sẹẹli-cell, itankale gaasi, ibaraenisepo pẹlu matrix) ni bayi ngbanilaaye awọn laini sẹẹli kan lati gbin ni media laisi omi ara.
1.Culture ayika yoo ni ipa lori idagbasoke sẹẹli
Jọwọ ṣe akiyesi pe awọn ipo aṣa sẹẹli yatọ fun iru sẹẹli kọọkan.
Awọn abajade ti yiyapade lati awọn ipo aṣa ti o nilo fun iru sẹẹli kan pato yatọ lati ikosile ti awọn aiṣedeede phenotypes si ikuna pipe ti aṣa sẹẹli.Nitorinaa, a ṣeduro pe ki o faramọ laini sẹẹli ti o nifẹ si ati tẹle awọn ilana ti a pese fun ọja kọọkan ti o lo ninu idanwo rẹ.
2.Precautions fun ṣiṣẹda iṣapeye agbegbe asa sẹẹli fun awọn sẹẹli rẹ:
Media aṣa ati omi ara (wo isalẹ fun alaye diẹ sii)
pH ati awọn ipele CO2 (wo isalẹ fun alaye diẹ sii)
Gbin ṣiṣu (wo isalẹ fun alaye diẹ sii)
Awọn iwọn otutu (wo isalẹ fun alaye diẹ sii)
2.1 Asa Media ati omi ara
Alabọde aṣa jẹ apakan pataki julọ ti agbegbe aṣa, nitori pe o pese awọn ounjẹ, awọn okunfa idagbasoke ati awọn homonu ti o nilo fun idagbasoke sẹẹli, ati ṣe ilana pH ati titẹ osmotic ti aṣa.
Botilẹjẹpe awọn adanwo aṣa sẹẹli akọkọ ni a ṣe ni lilo media adayeba ti a gba lati awọn iyọkuro ti ara ati awọn fifa ara, iwulo fun iwọntunwọnsi, didara media, ati ibeere ti o pọ si yori si idagbasoke ti media asọye.Awọn oriṣi ipilẹ mẹta ti media jẹ media basal, media media ti o dinku ati media ti ko ni omi ara, ati pe wọn ni awọn ibeere oriṣiriṣi fun afikun omi ara.
2.1.1 Ipilẹ alabọde
Gibco cell asa alabọde
Pupọ awọn laini sẹẹli dagba daradara ni awọn media ipilẹ ti o ni awọn amino acids, awọn vitamin, awọn iyọ inorganic, ati awọn orisun erogba (bii glukosi), ṣugbọn awọn agbekalẹ media ipilẹ wọnyi gbọdọ jẹ afikun pẹlu omi ara.
2.1.2 Dinku alabọde omi ara
Igo pẹlu Gibco Low Serum Medium
Ilana miiran lati dinku awọn ipa buburu ti omi ara ni awọn adanwo aṣa sẹẹli ni lati lo awọn media ti o dinku omi ara.Alabọde omi ara ti o dinku jẹ agbekalẹ alabọde ipilẹ ti o ni ọlọrọ ninu awọn ounjẹ ati awọn nkan ti o jẹ ti ẹranko, eyiti o le dinku iye omi ara ti o nilo.
2.1.3 Omi-free alabọde
Igo pẹlu Gibco omi ara-free alabọde
Alabọde ti ko ni omi ara (SFM) yika lilo omi ara ẹran nipa rirọpo omi ara pẹlu ounjẹ ti o yẹ ati awọn agbekalẹ homonu.Ọpọlọpọ awọn aṣa akọkọ ati awọn laini sẹẹli ni awọn agbekalẹ alabọde ti ko ni omi ara, pẹlu Kannada Hamster Ovary (CHO) laini iṣelọpọ amuaradagba, ọpọlọpọ awọn laini sẹẹli hybridoma, awọn laini kokoro Sf9 ati Sf21 (Spodoptera frugiperda), ati fun Olugbalejo fun iṣelọpọ ọlọjẹ (fun apẹẹrẹ, 293, VERO, MDCK, MDBK), ati bẹbẹ lọ Ọkan ninu awọn anfani akọkọ ti lilo alabọde ti ko ni omi ara ni agbara lati ṣe yiyan alabọde fun awọn iru sẹẹli kan pato nipa yiyan apapo ti o yẹ fun awọn ifosiwewe idagbasoke.Tabili ti o tẹle ṣe atokọ awọn anfani ati aila-nfani ti media ti ko ni omi ara.
Anfani
Mu wípé
Diẹ dédé išẹ
Rọrun ìwẹnumọ ati ibosile processing
Ṣe ayẹwo deede iṣẹ sẹẹli
Mu iṣelọpọ pọ si
Iṣakoso to dara julọ ti awọn aati ti ẹkọ iṣe-ara
Wiwa media sẹẹli ti ni ilọsiwaju
Alailanfani
Cell iru pato alabọde agbekalẹ awọn ibeere
Nilo ga reagent ti nw
Ilọkuro ninu idagbasoke
2.2.1 pH ipele
Pupọ julọ awọn laini sẹẹli mammalian deede dagba daradara ni pH 7.4, ati awọn iyatọ laarin oriṣiriṣi awọn ila sẹẹli jẹ kekere.Bibẹẹkọ, diẹ ninu awọn laini sẹẹli ti a ti yipada ti han lati dagba daradara ni agbegbe ekikan diẹ (pH 7.0 - 7.4), lakoko ti diẹ ninu awọn laini sẹẹli fibroblast deede fẹ agbegbe ipilẹ ipilẹ (pH 7.4 – 7.7).Awọn laini sẹẹli kokoro bii Sf9 ati Sf21 dagba dara julọ ni pH 6.2.
2.2.2 CO2 ipele
Alabọde idagba n ṣakoso pH ti aṣa ati fifẹ awọn sẹẹli ninu aṣa lati koju awọn ayipada ninu pH.Nigbagbogbo, ifiṣura yii jẹ aṣeyọri nipasẹ nini Organic (fun apẹẹrẹ, HEPES) tabi awọn buffers ti o da lori CO2-bicarbonate.Nitori pH ti alabọde da lori iwọntunwọnsi elege ti tuka carbon oloro (CO2) ati bicarbonate (HCO3-), awọn iyipada ninu CO2 ti afẹfẹ yoo yi pH ti alabọde pada.Nitorinaa, nigba lilo buffered alabọde pẹlu ifipamọ orisun-CO2-bicarbonate, o jẹ dandan lati lo CO2 exogenous, ni pataki nigbati dida awọn sẹẹli ni awọn awopọ aṣa ṣiṣi tabi dida awọn laini sẹẹli yipada ni awọn ifọkansi giga.Botilẹjẹpe ọpọlọpọ awọn oniwadi nigbagbogbo lo 5-7% CO2 ni afẹfẹ, ọpọlọpọ awọn adanwo aṣa sẹẹli nigbagbogbo lo 4-10% CO2.Sibẹsibẹ, alabọde kọọkan ni iṣeduro CO2 ẹdọfu ati ifọkansi bicarbonate lati ṣe aṣeyọri pH ti o tọ ati titẹ osmotic;fun alaye siwaju sii, jọwọ tọkasi awọn alabọde olupese ká ilana.
2.3 Digba pilasitik
Awọn pilasitik aṣa sẹẹli wa ni ọpọlọpọ awọn fọọmu, titobi ati awọn aaye lati baamu awọn ohun elo aṣa sẹẹli lọpọlọpọ.Lo itọsọna dada ṣiṣu aṣa sẹẹli ati itọsọna eiyan sẹẹli ni isalẹ lati ṣe iranlọwọ fun ọ lati yan ṣiṣu ti o tọ fun ohun elo aṣa sẹẹli rẹ.
Wo gbogbo Thermo Scientific Nunc cell pilasitik asa (ọna asopọ ipolowo)
2.4 Awọn iwọn otutu
Iwọn otutu ti o dara julọ fun aṣa sẹẹli da lori iwọn otutu ti ara ti ogun lati eyiti awọn sẹẹli ti ya sọtọ, ati ni iwọn diẹ si awọn iyipada anatomical ni iwọn otutu (fun apẹẹrẹ, iwọn otutu awọ-ara le jẹ kekere ju ti iṣan egungun lọ. ).Fun aṣa sẹẹli, igbona pupọ jẹ iṣoro to ṣe pataki ju igbona lọ.Nitorinaa, iwọn otutu ti o wa ninu incubator nigbagbogbo ṣeto diẹ ni isalẹ iwọn otutu to dara julọ.
2.4.1 Iwọn otutu ti o dara julọ fun ọpọlọpọ awọn ila sẹẹli
Pupọ julọ awọn laini sẹẹli ti eniyan ati ẹran mammalian ni a tọju ni 36°C si 37°C fun idagbasoke to dara julọ.
Awọn sẹẹli kokoro ni a gbin ni 27 ° C fun idagbasoke to dara julọ;wọn dagba diẹ sii laiyara ni awọn iwọn otutu kekere ati awọn iwọn otutu laarin 27 ° C ati 30 ° C.Ni oke 30 ° C, agbara ti awọn sẹẹli kokoro dinku, paapaa ti o ba pada si 27°C, awọn sẹẹli naa ko ni gba pada.
Awọn laini sẹẹli afefe nilo 38.5°C lati de idagbasoke ti o pọju.Botilẹjẹpe a le tọju awọn sẹẹli wọnyi ni 37°C, wọn yoo dagba diẹ sii laiyara.
Awọn laini sẹẹli ti o wa lati awọn ẹranko ti o ni ẹjẹ tutu (gẹgẹbi awọn amphibians, ẹja omi tutu) le farada iwọn otutu ti o gbooro ti 15°C si 26°C.
Akoko ifiweranṣẹ: Kínní-01-2023